Ръководство за практически занятия по вирусология Аргирова
Сумата се прибавя директно в кошницата
5.25 €
.
За повече информация: order@kopiebg.com
Съдържание
Използвани съкращения 9
I. Култивиране на вируси в кокоши ембриони 11
1. Работа с кокоши ембриони 13
1.1. Подбор на оплодените яйца 14
1.2. Инкубиране на оплодените яйца 15
1.3. Заразяване на кокоши ембриони 16
1.3.1. Заразяване на хорион-алантоисна мембрана 18
1.3.2. Заразяване на алантоисния сак 19
1.3.3. Заразяване в амниотичния сак 21
1.3.4. Заразяване в жълтъчния сак 22
1.4. Инкубиране на заразените ембриони 23
1.5. Събиране на инфекциозни течности
от предварително заразените яйца 24
1.5.1. Алантоисна течност 24
1.5.2. Амниотична течност 25
1.5.3. Жълтък 26
1.6. Отделяне на мембрани от предварително
заразените яйца 26
1.6.1. Хорион-алантоисна мембрана 27
1.6.2. Жълтъчна мембрана 28
1.6.3. Амниотична мембрана 29
1.7. Отделяне на всички части на оплоденото яйце -
ембриона, мембраните и течностите, изпълващи отделните празнини 30
Н. Култивиране на вируси 8 лабораторни животни 31
1. Взимане, обработка и съхранение
на вирусологична проба 32
2. Подбор на опитните животни за предизвикване
на експериментална инфекция с взетата вирусологична проба 36
3. Избор на метод за инокулиране
на взетия вирусен материал 36
3.1. Методи за заразяване 41
3.1.1. През храносмилателната система (per os) 41
3.1.2. Вътреносово (интраназално) 42
3.1.3. Вътревенно (интравенозно) 43
3.1.4. Вътремускулно (интрамускулно) 45
3.1.5. Вътрекоремно (интраперитонеално) 45
3.1.6. Вътремозъчно (интрацеребрално) 46
3.1.7. Подкожно (субкутанно) 47
3.1.8. Вътрекожно (интракутанно) 48
3.1.9. Чрез втриване 49
3.1.10. В окото 49
4. Секция на опитно животно 52
III. Клетъчни култури и приложението им
във вирусологията 54
1. Историческо развитие на метода
клетъчно култивиране 54
2. Видове култури 56
3. Приложение на клетъчните култури 57
4. Класификация на клетъчните култури в зависимост от метода и продължителността на култивиране 59
4.1. Продължителност на отглеждане на клетките
в условия in vitro 60
4.1.1. Първични клетъчни култури 60
4.1.2. Пасажни клетъчни култури 60
4.2. Метод на култивиране 62
4.2.1. Монослойни клетъчни култури 63
4.2.2. Суспензионни клетъчни култури 64
5. Среди за култивиране на клетки 65
5.1. Видове хранителни среди според състава им 65
5.1.1. Естествени хранителни среди 66
5.1.2. Синтетични хранителни среди 67
5.1.3. Полусинтетични хранителни среди 68
5.2. Видове хранителни среди
според предназначението им 68
6. Динамика на нарастване на клетките
в условия in vitro 69
7. Пасиране на клетъчни култури (субкултуриране) 71
8. Определяне на клетъчната численост и виталност 73
8.1. МТТ тест 73
9. Получаване на първична клетъчна култура от развиващи се кокоши ембриони -
пилешки ембрионални фибробласти 76
IV. Култивиране на вируси 8 клетъчни култури 78
1. Култивиране на вируси в монослойни
клетъчни култури 78
V. Количествено охарактеризиране на вирусната суспензия.
Титрация на вирусите 81
1. Методи за вирусна титрация 82
1.1. Методи, базирани на вирусната инфекциозност 82
1.1.1. Определяне на вирусния титър
на модел кокоши ембриони 83
7.7.2. Определяне на вирусния титър
на модел опитни животни 83
7.7.3. Определяне на вирусния титър на модел
клетъчни култури 87
VI. Изолиране, пречистване и доказване на вирус 108
1. Изолиране на HSV (изготвяне на вирусен сток) 108
2. Пречистване на вирус 110
2.1. Концентриране на вируси чрез преципитация с полиетиленгликол в присъствие
на 0,5 М NaCI ПО
2.2. Центрофугиране 111
3. Доказване на вирус П7
3.1. Индиректна детекция на вирус. Детекция,
базирана на вирусната инфекциозност 118
3.7. 7. Реакция хемадсорбция ( РХАд) П9
3.1.2. Реакция хемаглутинация (РХА) 120
3.2. Директна детекция и серологични методи
за доказване и типизиране на вирус 121
3.2.1. Електронна микроскопия (ЕМ) 122
Калина Шишковз, Антон Хинков
3.2.2. Светлинна микроскопия 124
3.2.3. Реакция свързване
на комплемента (РСК) 129
3.2.4. Реакция задръжка
на хемаглутинацията (РЗХА) 132
3.2.5. Реакция задръжка
на хемадсорбцията (РЗХАд) 136
3.2.6. Вирус неутрализираща реакция (ВНР) 137
3.2.7. Молекулярни техники за директно откриване
на вирусни геноми. PCR техники за доказване присъствието на вирусен геном 141
3.3. Примерен протокол за изолиране и доказване
на HHV-1 ДНК геном 154
3.3.1. ДНК екстракционни процедури 154
3.3.2. Количествена и качествена оценка
на екстрахираните ДНК 156
3.3.3. Полимеразна верижна реакция
(Polymerase chain reaction, PCR) 157
VII. Скрининг на вещества за антивирусно действие.
Примерен протокол 161
1. Примерен протокол 162
1.1. Материали 162
1.2. Методи 163
Използвана литература 173
.
